Desarrollo de nuevas estrategias antimicrobianas : silenciamiento de genes bacterianos mediante tecnología antisentido
La emergencia de enfermedades infecciosas causadas por bacterias multiresistentesy la falta de antibióticos para su tratamiento constituyen una amenazapara la salud global. Ante la necesidad de desarrollo de nuevos antimicrobianos seha considerado la posibilidad de emplear técnicas de silenciamiento...
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| Tipo de recurso: | tesis doctoral |
| Estado: | Versión publicada |
| Fecha de publicación: | 2016 |
| País: | Argentina |
| Institución: | Universidad Nacional de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales |
| Repositorio: | Biblioteca Digital (UBA-FCEN) |
| Idioma: | español |
| OAI Identifier: | tesis:tesis_n5940_DaviesSala |
| Acceso en línea: | https://hdl.handle.net/20.500.12110/tesis_n5940_DaviesSala |
| Access Level: | acceso abierto |
| Palabra clave: | RIBOZIMA P ANTIMICROBIANOS SILENCIAMIENTO GENICO TECNOLOGIA ANTISENTIDO FTSZ ACINETOBACTER BAUMANNII RIBOZYME P ANTIMICROBIAL GENE SILENCING ANTISENSE TECHNOLOGY GRAM NEGATIVE |
| Sumario: | La emergencia de enfermedades infecciosas causadas por bacterias multiresistentesy la falta de antibióticos para su tratamiento constituyen una amenazapara la salud global. Ante la necesidad de desarrollo de nuevos antimicrobianos seha considerado la posibilidad de emplear técnicas de silenciamiento génicomediado por ARNs antisentido. Una de estas estrategias de silenciamiento es ladenominada tecnología EGS, que se encuentra mediada por la Ribozima P o ARNasa P, una ribozima presente en todos los dominios y que en bacterias Gramnegativas está conformada por una subunidad ARN-catalítica y por otra proteica. La ARNasa P participa en la maduración de los ARN de transferencia generando elextremo 5´ maduro por un corte simple endonucleolítico de su precursor. Esta propiedad puede emplearse para mediar el corte de una molécula de ARN blanco - cuya expresión quiera ser silenciada- en presencia de un oligorribonucleótido complementario, conocido como External Guide Sequence (EGS). Una vez formado el dúplex ARN blanco : EGS, este complejo puede ser reconocido por la ARNasa Pcomo sustrato y entonces promover el corte endonucleolítico del ARN blanco,inactivándolo. El objetivo global en el que se enmarca este trabajo de tesisconsiste en evaluar estrategias de silenciamiento génico mediante tecnologíaantisentido como posibles antimicrobianos o para prolongar el uso de losantibióticos ya existentes. En este trabajo de tesis doctoral se exploró la posibilidad de inhibir laexpresión de genes bacterianos a través del uso de tecnología EGS antisentido. Inicialmente se trabajó con cepas de Escherichia coli y como blanco se eligió al ARN mensajero del gen ftsZ cuyo producto, la proteína FtsZ es un análogobacteriano de la tubulina y esencial para la división celular. Tanto la expresión deestos pequeños ARNs antisentido dirigidos contra el mensajero ftsZ como laadministración exógena de análogos de ácidos nucleicos no hidrolizables pornucleasas bacterianas, generaron una inhibición de la división celular, originandoun cambio en la morfología de las bacterias y una disminución de la viabilidad delas células tratadas. Estos resultados apoyan la idea que los EGSs dirigidos contragenes vitales bacterianos podrían considerarse como potenciales antimicrobianos. Con la intención de explorar la aplicación de esta tecnología desilenciamiento génico a una especie bacteriana de importancia clínica creciente, selogró identificar, clonar, transcribir y purificar los componentes de la ribozima Pde Acinetobacter baumannii. Posteriormente, la ribozima se reconstituyó in vitro,presentando actividad tanto en presencia de un sustrato natural (pre-ARNtTyr)como de un sustrato bimolecular compuesto por una dupla ARNm-EGS. De estamanera, se generó un sistema de evaluación in vitro de EGSs candidatos para Acinetobacter baumannii, paso previo a la realización de ensayos in vivo sobreesta especie bacteriana. |
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