Purificación, caracterización bioquímica y cristalización de la enzima XanA y dos variantes truncas en el extremo N-terminal

"En el metabolismo de las purinas la degradación de xantina a ácido úrico es mediada por la enzima xantina oxidasa. Sin embargo, en el 2005 se describió una nueva vía de degradación alternativa en Aspergillus nidulans mediada por la enzima xantina dioxigenasa dependiente de Fe2+ y α-cetoglutara...

Descripción completa

Detalles Bibliográficos
Autor: MA. GUADALUPE SEGURA COVARRUBIAS
Tipo de recurso: tesis de maestría
Estado:Versión publicada
Fecha de publicación:2016
País:México
Institución:Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica
Repositorio:Repositorio Institucional del IPICYT
Idioma:español
OAI Identifier:oai:ipicyt.repositorioinstitucional.mx:1010/736
Acceso en línea:http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/305
http://ipicyt.repositorioinstitucional.mx/jspui/handle/1010/736
Access Level:acceso abierto
Palabra clave:info:eu-repo/classification/Autor/XanA
info:eu-repo/classification/Autor/Cristalización de proteínas
info:eu-repo/classification/Autor/Purificación de proteínas
info:eu-repo/classification/Autor/Modelado in sillico
info:eu-repo/classification/cti/2
info:eu-repo/classification/cti/24
info:eu-repo/classification/cti/2415
Descripción
Sumario:"En el metabolismo de las purinas la degradación de xantina a ácido úrico es mediada por la enzima xantina oxidasa. Sin embargo, en el 2005 se describió una nueva vía de degradación alternativa en Aspergillus nidulans mediada por la enzima xantina dioxigenasa dependiente de Fe2+ y α-cetoglutarato (α-CG, XanA). Esta vía, es exclusiva de hongos como A. clavatus, en algunas levaduras como C. albicans, S. pombe y en los géneros Penicillium y Taleromyces, entre otros. XanA es una enzima de 370 residuos de aminoácidos y 41.3 kDa, que presenta un identidad del 18% con la enzima taurina/ α-CG dioxigenasa (TauD). El mecanismos catalítico de XanA aún no ha sido descrito y dentro del grupo de las hidroxilasas dependientes de Fe2+ y α-CG, es la única capaz de hidroxilar una purina libre. La estructura tridimensional de la enzima XanA aún no ha sido reportada, por lo tanto el objetivo de este trabajo es caracterizar y cristalizar la proteína XanA. La proteína fue expresada en la cepa BL21 (DE3) Star de E.coli utilizando 0.4 mM de IPTG. La enzima se purificó en dos etapas, IMAC y filtración en gel, con un rendimiento final de 15 mg/L. Los estudios de cinética enzimática muestran que la enzima XanA silvestre es activa y su cinética se ajusta a la ecuación de Michaelis-Menten con una Km para el α-CG de 97.9 ± 13.9 μM. Realizamos ensayos de cristalización con XanA silvestre (monomérica), y obtuvimos una aproximación a las condiciones adecuadas para obtener cristales."

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